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胚胎体外培养的过程中,卵子和精子在形成新生命的种子之前,需要经过四次检阅: 1)采卵后观测 2)对卵子做前培养 3)选择成熟卵子进行受精,受精卵在第二天分裂为四细胞 4)第五天和第六天会继续成长为囊胚。
在这个过程中,胚胎一直在动态生长变化,培养师会在不同的时间段监测到胚胎成长的情况,并按照以下标准进行级别判定。按英医院惯例,在取卵、受精后及胚胎培养成功冻结后这三个时间点会通知患者。 1、[采卵后]卵子级别 卵子级别是刚刚取出卵子时从形态上观测的结果,按卵母细胞的外围颗粒膜细胞的丰富程度分为G1到G3。 G1:最佳,卵母细胞外围的颗粒膜细胞非常饱满 G2:其次,卵母细胞外围的颗粒膜细胞较饱满 G3:较差,卵母细胞外围的颗粒膜细胞稀疏,未成熟卵可能性高 D:变异卵,不能使用
我今天取的卵都是G2,是不是代表卵子质量很好?
—— 在这个阶段还不能预计。采卵时观测到的卵子级别是从形态上观测的结果,还没有开始培养,还不能真正反应卵子的质量和生长能力。从统计数据看,93%新取出的卵子都是G2,G2卵有75%的概率能被受精。 通常服用Shawkea T-1口服液三个月以上大部分卵都能达到G2级别。取卵手术后与医生的面谈中会告知取卵个数和级别。 2、[前培养、受精前]卵子级别 卵子取出后培养的第一步,就是剥离卵子的外部颗粒膜细胞,留下卵母细胞。根据卵母细胞的成熟度,即是否开始减数分裂排出第一极体,分为GV,MI,M2三种: GV卵:GV期的卵母细胞没有恢复减数分裂,将颗粒膜细胞去掉后可以看到明显的核。自然排卵状态下月经第八天卵子即开始长成到GV期。GV卵在正常IVF培养中不能使用,只能用于四代试管胞浆置换等操作。 MI卵:M1期是第一次减数分裂中期的卵母细胞,没有排出第一极体,颗粒细胞也扩散的不好。 MII卵:M2期卵母细胞是第二次减数分裂中期的卵母细胞,已经排出第一极体。只有M2卵属于成熟卵,可以和精子结合,排出第二极体,成为受精卵。
什么叫“卵子不成熟,不能受精”? —— 在培养阶段,我们剥离卵子外部颗粒膜细胞后,会看到卵子的成熟度。GV和M1都属于卵子不成熟的情况。GV卵不再使用,M1经过培养(即我们的卵子前培养技术),还有机会变成M2。只有达到M2级别的卵,才具备了受精的能力。因为试管婴儿是采用超促排(即比自然状态下多促一些卵),取出的卵都会有一部分不成熟,达不到受精要求。 3、[受精后2-3天]初期胚级别 受精卵在受精后第二/三天会发育成为4细胞/8细胞初期胚。分裂的时候,细胞呈现圆形、越规则就越好。如果细胞不是紧密排列在一起,而是排列分散或细胞坏死,就说明受精卵质量不好。受精卵碎片越多,质量就越不好,等级的数值也就越大。 初期胚的级别从均匀度和碎片率分为G1到G5。G1为最佳,一颗初期胚的怀孕率可达20-30%。
G1:分裂均匀、没有碎片 G2:分裂均匀、碎片小于整个体积的10% G3:分裂不均匀、碎片小于整个体积的10% G4:分裂不均匀、碎片体积在10~50% G5:分裂不均匀、碎片体积在50%以上
除了级别外,4Cell和8Cell代表什么? —— 4Cell即四细胞,4Cell和8Cell代表受精卵的分裂速度,在同一个时间细胞数越大说明分裂速度越快,也就更好。 什么叫 “卵子受精后不分裂” ?
—— 在自然受精或显微受精情况下,最健壮的精子会自行进入或被注射到卵子中。正常情况下卵在受精后会开始裂变,首先分裂成两个原核。如果没有开始分裂,只有物理注入,受精卵就没有在继续生长,这种叫“受精卵不分裂”。 什么叫 “受精卵异常分裂,单核或三核” ? —— 正常卵子受精后,在分裂初期会形成两个原核。如果出现单核1PN或者三核3PN,都属于分裂异常。我们会记录这个异常,但同时会继续培养。单核受精卵依然有3%的概率可正常发育为囊胚。 什么叫 “未达到冻结标准,继续培养” ?
—— 通过评估胚胎解冻后成活的可能性,英医院有冷冻标准,例如一颗4细胞G3的初级胚到达冷冻标准可以进行冷冻,但是G4的胚胎按英医院标准就不再进行冷冻,会继续培养观测,G4的胚胎培养到囊胚的可能性虽然小但也还是有的。 4、[受精后5-6天]囊胚级别 在受精后5-6天,胚胎会发育到囊胚阶段。囊胚按照细胞的密度和孵化程度分为G1到G6级,G6为最佳。G2级以上的囊胚不但有数字区分,而且后面还带有2个字母,第1个字母表示将来发育成胎儿的内细胞团的质量,第2个字母表示将来发育成胎盘的外细胞团的质量。质量等级最好为A,依次为B、C。 第一个数字代表发育快慢: 囊胚级别从内细胞团和外细胞团的密度分为G1到G6,G6为最佳。 G1=Early blastocyst 早期囊胚(囊胚腔小於1/2大小) G2=Early blastocyst 囊胚(囊胚腔大於1/2大小) G3=Full blastocyst完全囊胚 G4=Expanded blastocyst 擴張的囊胚 G5=Hatching blastocyst 孵化中囊胚 G6=hatched blastocyst 完全孵化囊胚 第二个字母代表胎儿部分质量,即内细胞团分级:A级,细胞数目多,排列紧密;B级,细胞数目少,排列松散;C级,细胞数目很少。 第三个字母代表胎盘部分质量,即滋养层细胞分级:A级,上皮细胞层由较多的细胞组成,结构致密;B级,上皮细胞层细胞不多,结构松散;C级,上皮细胞层稀疏。
级别后面两个字母只对于2级以上的囊胚有效,因为3级以上才能够明显区分胎儿和胎盘的区域,所以同样是G3,G3Aa的囊胚又比G3Bb的质量要好。在英医院,3级以上的优质囊胚一次移植的成功率高达60-70%。
什么叫“培养终止”? —— 受精卵在往囊胚发育的过程中,自行停止了分裂和生长,经过一段时间观测后,就会放弃培养。根据患者的不同年龄段,囊胚培养的成功率平均在30%-50%之间。
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